質體DNA抽取中95%酒精的原理、功用與細菌的轉殖作用(急) - 酒精

質體DNA抽取實驗我們使用鹼溶裂法
步驟：
1 取E.coli菌液營養肉湯置於離心機，以13000rpm轉l min後倒 出上清 液。
2 將倒出上清液之tube加入solution I 100 µl再以pipet反覆吸吐使之混勻，並置於冰桶3 min。
3 3 min後取出tube再加入solution II 200 µl在上下搖晃並置入冰桶5min
4 5 min後取出tube再加入solution III 150 µl在上下搖晃等出現白色懸浮物置入冰桶5 min。
5 5 min後取出tube置於離心機13000rpm 10 min 後會分兩層，取上清液 400 µl至新tube(勿取到混濁物)。
6 新tube加入400 µl phenol後置於votex上使之混濁。
7 將混濁之tube置入離心機13000rpm 5 min。
8 5 min後tube會分兩層(下:有機；上:水層)，取水層至新tube後加入1㏄ 95%酒精。
9 將tube置入 – 80℃冰箱中 放置一周

問題一:95%酒精的原理、功用??,為何要用低溫使DNA沉澱??
細菌的轉殖作用
大腸桿菌於一般環境下不容易吸收外來的DNA,在氯化鈣的處理下,DNA才可進入細菌體內,表示細菌處在一種叫勝任狀態,能夠接收外來的DNA,這時的細胞稱為勝任細胞.
問題二:細菌除了氯化鈣於基因轉殖還有哪些方法??
謝謝你的幫忙~~~感激不盡!!!
Update:
我是大一生,這是我們實驗課要討論的題目
因為不知如何在短時間內找到答案,所以懇請大家的幫忙!!!
我知道為何此實驗要用95%酒精,
95%酒精會將蛋白質水解以利質體DNA沉澱,
可是何要用低溫使DNA沉澱??
殺菌只用70%酒精,因為過高%數的酒精會使細菌細胞膜變性,反而無法徹底殺菌,經實驗結果證明70%酒精的殺菌效果最好.
請大家幫忙一下~~謝謝!!!